Teste da reunião do jogo de (SM) ELISA da estreptomicina
1. Princípio
Este jogo do teste é baseado no immunoassay competitivo da enzima para a detecção de resíduo das sulfas. Os antígenos do acoplamento são pré-revestidos nas micro-bem listras. As sulfas na amostra e nos antígenos do acoplamento pré-revestidos nas micro-bem listras competem para os anticorpos das anti-sulfas. Depois que a adição do conjugado da enzima, a carcaça de TMB é adicionada para a coloração. O valor de (OD) da densidade ótica da amostra tem uma correlação negativa com as sulfas na amostra. Este valor é comparado à curva padrão e a concentração das sulfas é obtida subseqüentemente.
2. especificações técnicas
Sensibilidade: 1 ppb
Temperatura da incubadora: 25℃
Tempo da incubadora: 30min~15min
Limite de detecção
Tecido (método do alto-detecção-limite) 0,4 ppb
Ppb 5 do tecido (método do baixo-detecção-limite)
Ppb Honey1
Sensibilidade: 0,1 ppb
Temperatura da incubação: 37℃
Tempo da incubação: 30min-30min-15min
Limite de detecção:
Ppb da galinha 1
O fígado de galinha, ordenha o ppb 4
Mel, ppb da geleia real 2
Taxa de recuperação:
Leite 85±22%
Galinha 80±17%
Mel, geleia real 75±19%
Taxa da reação cruzada:
Estreptomicina 100%
Dihydrostreptomycin 108%
Conclusão <0>
de Kalamycin <0>
Gentamycin seleccionada da taxa da reação cruzada: Este jogo pode ser usado para o teste das sulfas, encontra totalmente a procura nacional dos testes das sulfas.
Taxa de recuperação
Tecido, urina, milk85±25%
Mel, serum80±23%
3. componentes
1) Micro-bem tiras: 12 tiras com os 8 poços removíveis cada um
2) solução 6× padrão (1 mL cada): 0 ppb, 0,1 ppb, 0,4 ppb, 1,6 ppb, 6,4 ppb, ppb 25,6
3) (12 mL) tampão vermelho conjugado enzima
4) Tampão azul de solução de funcionamento do anticorpo 7 mL) (
5) Tampão branco da solução da carcaça A 7 mL) (
6) Tampão do preto da solução da carcaça B (7 mL)
7) Pare o tampão do amarelo da solução (7 mL)
8) 20× concentrou 40 mL) o tampão branco de lavagem do amortecedor (
9) 10× concentrou redissolving 50 mL) o tampão transparente da solução (
4. materiais exigidos mas não fornecidos
1) Equipamento: o leitor do microplate, impressora, homogenizador, dispositivo da nitrogênio-secagem, centrifugador, medindo introduz com pipeta, equilíbrio (uma sensibilidade recíproca de 0,01 g), incubadora
2) Micropipettes: µL 20-200, 100-1000 µL do monocanal, e µL do multi-canal 30-300;
3) Reagentes: Acetonitrilo (CH3CN), acetato de etilo, N-hexano, K2HPO4·12H2O, monohidrato do ácido cítrico (C6H8O7·H2O), HCl, NaOH, CH2Cl2,
5. pré-tratamento da amostra
Instruções (os seguintes pontos devem ser tratados antes do pré-tratamento)
1) Somente as pontas descartáveis podem ser usadas para as experiências e as pontas devem ser mudadas quando usadas para absorver reagentes diferentes;
2) Antes da experiência, cada utensílio experimental deve estar limpo e deve re-ser limpado caso necessário, a fim evitar a contaminação que interfere com os resultados experimentais.
Preparação da solução antes do pré-tratamento da amostra:
1) solução do NaOH de 0.2M: Pese NaOH 0.8g, dissolva-o com água deionized 100ml;
2) HCl de 0.5M: Tome HCl 4.3ml, dissolva-o com água deionized a 100ml, mistura uniformemente;
3) Na2HPO4- C6H8O7·Amortecedor de H2O: pese 19.85gNa2HPO4·12H2O e 9.3g C6H8O7·H2O, dissolvem-se com água deionized a 1L, mistura uniformemente;
4) Solução CH3CN-CH2Cl2: V CH3CN: V =1:4 CH2Cl2;
5) A solução dedissolução concentrada 20× é diluída com água deionized no 1:19 (solução dedissolução concentrada de 1 partes + 19 porções da água deionized).
5,1 tecido
Método do Alto-detecção-limite do A.
Método um
1) Pese 2,0 o ± 0,05 g da amostra de tecido homogeneizada no tubo de centrifugador de 50 ml, adicione 6 ml de acetato de etilo, agitação para 2 minuto, centrifugador acima de 4000 r/min no ℃ 15 para o minuto 10;
2) Tome a 3 ml a fase orgânica clara em um recipiente seco, funda para secar completamente com nitrogênio ou ar pela evaporação giratória no ℃ 50-60
6) Dissolva os resíduos secos em 1 mL da solução dedissolução diluída, adicione 1 mL de N-hexano, mistura por 30 segundos; centrifugue acima de 4000 r/min em 15℃ por 5 Min. removem a fase superior do N-hexano da camada,
7) Tome a solução da para baixo-camada 50µl para a análise mais aprofundada.
Dobra da diluição da amostra: 1
Método dois
1) Pese 2 o ± 0,05 g da amostra homogeneizada, põe-no no tubo do centrifugador 50ml;
2) Adicione a solução de 8ml CH3CN-CH2Cl2, agitação para 5min, centrifugador acima de 4000 r/min no ℃ 15 para o minuto 10;
3) Transfira uma fase orgânica de 4 ml em um recipiente seco, funda para secar completamente com nitrogênio ou ar pela evaporação giratória no ℃ 56
4) Adicione 1 mL da solução dedissolução diluída re-para dissolver o resíduo seco, adicione 1 mL de N-hexano, e agite-o para 30s. Centrifugue acima de 4000 r/min em 15℃ para o minuto 5;
5) Remova a fase superior do N-hexano da camada. Tome 50 que o µL mergulha para baixo a solução para a análise mais aprofundada.
Dobra da diluição da amostra: 1
Método do baixo-detecção-limite de B. Tecido
1) Pese 2,0 o ± 0,05 g da amostra homogeneizada em um tubo centrífugo de 50 ml, adicione a solução dedissolução diluída 8 mL, agitação para 2 minuto, centrifugador acima de 4000 r/min no ℃ 15 para o minuto 10;
2) Tome a solução de 50 µL para a análise mais aprofundada.
Dobra da diluição da amostra: 5
5,2 soro
1) Coloque a amostra do soro na temperatura ambiente para 30 minuto, centrifugador acima de 4000r/min no ℃ 10 para o minuto 10, separação do soro ou soro do filtro
2) Tome o soro de 1 mL e adicione 3mL a solução dedissolução diluída, mistura para 30s.
3) Tome a solução de 50 µL para a análise mais aprofundada
Dobra da diluição da amostra: 4
5,3 mel
1. pese a amostra do mel de 2±0.05 g, adicionam 4 mL de 0,1 M H3PO4, agitação até dissolvido inteiramente.
2. centrifugue acima de 4000 r/min na temperatura ambiente (℃ 20-25) para o minuto 5, até que o líquido esteja claro (a amostra do mel pode diretamente a etapa 3 sem centrifugador).
3. adicione o µL 900 NaOH de 1 M, ajustam o PH a 7-9 (para a geleia real, transfira o Supernatant a uma embarcação nova).
4. centrifugue acima de 4000 r/min na temperatura ambiente (℃ 20-25) para o minuto 5, até que o líquido esteja claro.
5. tome o supernatant de 50 µL, adicione o µL 350 da solução dedissolução diluída, e misture-o uniformemente para 30s.
6. tome a 50 o µL para a análise mais aprofundada.
Dobra da diluição da amostra: 20
5,4 urina
1. adicione 3 mL a solução dedissolução diluída e 1 mL da amostra de urina clara centrifugada, mistura corretamente para 30s.
2. tome a 50 o µL para a análise mais aprofundada
Dobra da diluição da amostra: 4
5,5 leite
1. tome 1 mL de leite, adicionam a solução dedissolução diluída, diluída no 1:19 (Ⅴ/Ⅴ) (leite de 20 µL + µL 380 a solução dedissolução diluída), e na mistura para 30s.
2. tome a 50 o µL para a análise mais aprofundada
Dobra da diluição da amostra: 20
6. procedimentos de ELISA
6,1 instruções
1. traga todos os reagentes e micro-bem tiras à temperatura ambiente (℃ 20-25) antes de usar;
2. retorne todos os reagentes ao ℃ 2-8 imediatamente depois do uso;
3. A reprodutibilidade da análise de ELISA, em grande parte, depende da consistência da lavagem da placa. A operação correta da lavagem da placa é o ponto-chave nos procedimentos de ELISA;
4. Para a incubação em temperaturas constantes, todas as amostras e reagentes devem evitar a exposição à luz, e cada microplate deve ser selado pela membrana da tampa.
6,2 procedimentos da operação
1. remova todos os reagentes necessários e coloque-os na temperatura ambiente (20-25 ℃) no mínimo 30min. Note que cada reagente deve ser agitado para misturar uniformemente antes de usar;
2. tome as micro-bem tiras e quadros exigidos da placa. Re-selou o microplate não utilizado, armazenado no ℃ 2 - 8;
3. preparação de lavagem do amortecedor: dilua 40 mL do amortecedor de lavagem concentrado 20× com água deionized no 1:19 (amortecedor de lavagem concentrado 20× de 1 partes + 19 porções da água deionized). Ou prepare o amortecedor de lavagem como a quantidade precisou.
4. numeração: numere os micro-poços de acordo com amostras e a solução padrão; cada amostra e solução padrão devem ser executadas em duplicado; grave suas posições;
5. adicione o µL 50 da amostra ou a solução padrão para separar poços duplicados, adiciona o µL 50 do conjugado da enzima, a seguir adiciona o µL 50 da solução de funcionamento do anticorpo em cada um bem. Misture agitando delicadamente, sele o microplate com a membrana da tampa, e incube-o em 25℃ para o minuto 30;
6. lave o microplate com o amortecedor de lavagem em 250 µL/well por quatro a cinco vezes.; embeba bem com o amortecedor de lavagem para o segundo 15-30, aleta para secar com papel absorvente (se há as bolhas após bater, cortam-nos com as pontas limpas);
7. coloração: adicione o µL 50 o µL da solução da carcaça A e 50 da solução de B em cada um bem. Misture agitando delicadamente, e incube no ℃ 25 para o minuto 15 na obscuridade para a coloração;
8. determinação: adicione 50 que o µL de para a solução em cada um bem. Misture agitando delicadamente. Ajuste o comprimento de onda do leitor do microplate em 450 nanômetro para determinar o valor do OD. (Recomende ler o valor do OD no duplo-comprimento de onda 450/630 de nanômetro dentro do minuto 5).
7. julgamento do resultado
Há dois métodos para julgar os resultados; primeiro é o julgamento áspero, quando o segundo for a determinação quantitativa. Note que o valor do OD da amostra tem uma correlação negativa com o índice das sulfas na amostra.
7,1 determinação qualitativa
A escala de concentração (ng/mL) obteve da comparação o valor médio do OD da amostra com o aquele da solução padrão. Supor que o valor do OD do Ⅰ da amostra é 0,3, e aquele do Ⅱ da amostra é 1,0, o valor do OD de soluções padrão é: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 1ppb, 1,415 para 3ppb, 0,74 para 9ppb, 0,313 para 27ppb, 0,155 para 81ppb, em conformidade a escala de concentração do Ⅰ da amostra são 27ppb a 81ppb, e aquele do Ⅱ da amostra é 3ppb a 9ppb. (Multiplicado pela dobra correspondente da diluição)
7,2 determinação quantitativa
Os valores médios dos valores da absorvência são equivalentes à porcentagem do valor médio do OD (b) da amostra e da solução padrão divididas pelo valor do OD (B0) da primeira solução padrão (0 padrões) e multiplicadas subseqüentemente em 100%, isto é,
Porcentagem do valor da absorvência = do B ×100% /B0
B-the calcula a média (poços dobro) do valor do OD da amostra ou da solução padrão
B0-the calculam a média do valor do OD da solução 0ng/mL padrão
Tire a curva padrão com as porcentagens da absorção das soluções padrão e semi os valores do logarítmo das soluções padrão das sulfas (ng/mL) como o y e a X-linha central, respectivamente. Leia a concentração correspondente da amostra da curva padrão incorporando sua porcentagem da absorção na curva padrão. O valor resultante é multiplicado subseqüentemente pela dobra correspondente da diluição, obtendo finalmente a concentração das sulfas na amostra.
Usar o software de análise profissional deste jogo será mais conveniente para a análise exata e rápida de uma grande quantidade de amostras. (Nos contacte por favor para este software).
8. precauções
1. A temperatura ambiente abaixo do ℃ 25 ou a temperatura dos reagentes e das amostras que não estão sendo retornados à temperatura ambiente (℃ 20-25) conduzirão a um valor mais baixo do OD do padrão.
2. a seca do microplate no processo de lavagem será acompanhada das situações que incluem as curvas padrão não-lineares e a reprodutibilidade indesejável; Continue assim ao passo seguinte imediatamente depois do lavagem.
3. misture uniformemente, se não haverá a reprodutibilidade indesejável.
4. A solução da parada é a solução ácida sulfúrica de 2 M, evita contactar com a pele.
5. Não use o jogo que excede sua data de expiração. O uso de reagentes diluídos ou adulterados dos jogos conduzirá às mudanças na sensibilidade e nos valores de detecção do OD. Não troque os reagentes dos jogos de números de lote diferentes para usar-se.
6. põe o microplate não utilizado em um re-selo do saco da auto-selagem ele. A substância padrão e a cor incolor anteriores são sensíveis à luz, e assim não pode diretamente ser exposta à luz.
7. rejeite a solução da coloração com toda a cor que indicar a degeneração desta solução. O valor de detecção das 0 soluções padrão de menos de 0,5 (A450 nanômetro< 0="">
8. A temperatura a melhor da reação é o ℃ 25, e as temperaturas demasiado altamente ou demasiado baixas conduzirão às mudanças na sensibilidade de detecção e em valores do OD.
9. data do armazenamento e de expiração
Armazenamento: loja no ℃ 2-8, não congelado.
Data de expiração: 1 ano; a data da produção está na caixa.
