Jogo do teste do Chloramphenicol ELISA
Teste o princípio
Princípio
Este jogo do teste é baseado no immunoassay competitivo da enzima para a detecção de Chloramphenicol na amostra. O antígeno do acoplamento é pré-revestido nas micro-bem listras. O Chloramphenicol na amostra e o antígeno do acoplamento pré-revestido nas micro-bem listras competem para o anticorpo do anti-Chloramphenicol. Depois que a adição do conjugado da enzima, a carcaça de TMB é adicionada para a coloração. O valor de (OD) da densidade ótica da amostra tem uma correlação negativa com o Chloramphenicol nele. Este valor é comparado à curva padrão e a concentração do Chloramphenicol é obtida subseqüentemente.
Especificações
Sensibilidade: 0.1ppb
Limite de detecção
Mel sobre 0.1ppb
Taxa da reação cruzada
Chloramphenicol 100%
Taxa < 0="">
de recuperação < 0="">
de Thiamphenicol Florfeniol
70±10%
Componentes
1) Micro-bem tiras: 12 tiras com os 8 poços removíveis cada um
2) solução 6× padrão (1 mL cada): 0 ppb, 0,05 ppb, 0,15 ppb, 0,45 ppb, ppb 1,35 ppb e 4,05
3) (12 mL) tampão vermelho conjugado enzima
4) Tampão azul concentrado de solução de funcionamento do anticorpo 1 mL) (
5) Tampão branco da solução da carcaça A 7 mL) (
6) Tampão do preto da solução da carcaça B (7 mL)
7) Pare o tampão do amarelo da solução (7 mL)
8) 20× concentrou 40 mL) o tampão branco de lavagem do amortecedor (
9) 2× concentrou 50 mL) o tampão transparente dedissolução da solução (
Materiais exigidos mas não fornecidos
1) Equipamentos: o leitor do microplate (450nm, 630nm), impressora, homogenizador, dispositivo da nitrogênio-secagem, redemoinho, abanador, centrifugador (3000g e acima), medindo introduz com pipeta, equilibra (uma sensibilidade recíproca de 0,01 g), incubadora (4℃, 25℃), banho maria, temporizador;
2) Micropipettors: µL 20-200, 100-1000 µL do monocanal, e µl do oito-canal 30~300;
3) Reagentes (AR): HCl, NaOH, acetato de etilo, n-hexano.
Pré-tratamento da amostra
Instruções
Os seguintes pontos devem ser tratados antes do pré-tratamento de qualquer tipo da amostra:
1.Only as pontas descartáveis pode ser usado para as experiências e as pontas devem ser mudadas quando usadas para absorver reagentes diferentes;
2. Antes da experiência, cada equipamento experimental deve estar limpo e deve re-ser limpado caso necessário, a fim evitar a contaminação que interfere com os resultados experimentais.
Preparação da solução antes do pré-tratamento da amostra:
Mel
1) Pese a amostra do mel de 2± 0,05 g no tubo de centrifugador 50ml plástico;
2) Adicione NaOH de 2ml 0.1M, agitação fortemente para 1min (ou redemoinho do uso para 30s) para dissolver-se;
3) Adicione o acetato, a agitação fortemente para 5min, (ou o redemoinho de etilo 4ml para 1min), fazendo o acetato da amostra e de etilo contactar completamente;
4) Centrifugue acima em 3000 g na temperatura ambiente para 5min;
5) Tome o supernatant 2ml no tubo 10ml de vidro (nota: não tome a fase da água da para baixo-camada), fundem para secar no banho maria 50-60℃ pelo dispositivo da nitrogênio-secagem;
6) adicione 0.5ml que Redissolving a solução, agitação fortemente para 2min (ou redemoinho do uso para 1min);
7) Tome a 50ul um mais baixo líquido da camada para o teste.
Dobra da diluição da amostra: 0,5
Procedimentos de ELISA
Instruções
1) Traga todos os reagentes e micro-bem tiras à temperatura ambiente (℃ 20-25) antes de usar;
2) Retorne todos os reagentes ao ℃ 2-8 imediatamente depois do uso;
3) A reprodutibilidade da análise de ELISA, em grande parte, depende da consistência da lavagem da placa. A operação correta da lavagem da placa é o ponto-chave em ELISA os procedimentos;
4) Para a incubação em temperaturas constantes, todas as amostras e reagentes devem evitar a exposição à luz, e cada microplate deve ser selado pela membrana da tampa.
Procedimentos da operação
1. traga o jogo do teste ao minuto 30 da temperatura ambiente (℃ 20-25) no mínimo, notam que cada reagente deve ser agitado para misturar uniformemente antes de usar, põem as micro-bem tiras exigidas em quadros da placa. Re-selou o microplate não utilizado, loja no ℃ 2-8, não se congelam.
2. numeração: numere os micro-poços de acordo com amostras e a solução padrão; cada amostra e solução padrão devem ser executadas em duplicado, gravam suas posições.
3. adicione o µL 50 da amostra ou da solução padrão em poços duplicados separados; adicione então o µL 50 da solução de funcionamento do anticorpo no cada bem, mistura delicadamente agitando a placa manualmente. Sele o microplate com a membrana da tampa, e incube-o no ℃ 4 para 60min na obscuridade.
4. derrame o líquido fora do microwell, batem para secar no papel absorvente, para adicionar 250 µL/well do amortecedor de lavagem ao microplate da lavagem para 15-30 s, a seguir para remover e a aleta a secar com papel absorvente, repete 3-4 vezes. (Se há as bolhas após bater, os cortou com as pontas limpas).
5. adicione o conjugado da enzima 100ul, mistura delicadamente agitando a placa manualmente (após ter lavado a placa, não a põe de lado para a). Sele o microplate com a membrana da tampa, e incube-o no ℃ 25 para 20min na obscuridade. Lavagem como etapa 4.
6. coloração: adicione a mistura 100ul da solução da carcaça A e da solução da carcaça B em cada um poço (nota: misture a solução da carcaça A e a solução da carcaça B no 1:1, usa a mistura em 10min, não usa o metal para conter ou agitar, evitar a carcaça inválida). Misture delicadamente agitando a placa manualmente, sele o microplate com a membrana da tampa a seguir incube-o no ℃ 25 para o minuto 15 na obscuridade para a coloração.
7. determinação: adicione o µL 50 da solução da parada em cada um bem. Misture delicadamente agitando a placa manualmente. Pare com sucesso quando cor da carcaça de azul ao amarelo. Recomende ler o valor do OD no duplo-comprimento de onda 450/630 de nanômetro dentro de 5 minutos.
Julgamento do resultado
Há dois métodos para julgar os resultados: primeiro é o julgamento áspero, quando o segundo for a determinação quantitativa. Note que o valor do OD da amostra tem uma correlação negativa com a concentração de Metronidazole.
1. determinação qualitativa
A escala de concentração (ng/mL) de Metronidazole pode ser obtida de comparar o valor médio do OD da amostra com o aquele da solução padrão. Supor que o valor do OD do Ⅰ da amostra é 0,3, e aquele do Ⅱ da amostra é 1,0, o valor do OD de soluções padrão é: 2,243 para 0 ppb, 1,816 para 0,1 ppb, 1,415 para 0,3 ppb, 0,74 para 0,9 ppb, 0,313 para o ppb 2,7, 0,155 para o ppb 8,1, em conformidade a escala de concentração do Ⅰ da amostra são o ppb 2,7 a 8,1, e aquele do Ⅱ da amostra é 0,1 a 0.9ppb.
2. determinação quantitativa
Os valores médios dos valores da absorvência são obtidos para o valor médio do OD (b) da amostra e da solução padrão divididas pelo valor do OD (B0) da primeira solução padrão (0 padrões) e multiplicadas subseqüentemente em 100%, isto é,
Porcentagem do valor da absorvência = do B ×100%
B0
Valor do OD da média de B-the da amostra ou da solução padrão
B0-the calculam a média do valor do OD das 0 soluções padrão de ng/mL
Tire a curva padrão com as porcentagens da absorção da solução padrão e os valores do semilogarithm da solução padrão do Chloramphenicol (ng/mL) como o y e a X-linha central, respectivamente. Leia a concentração correspondente da amostra da curva padrão incorporando sua porcentagem da absorção na curva padrão. O valor resultante é multiplicado subseqüentemente pela dobra correspondente da diluição, obtendo finalmente a concentração do Chloramphenicol na amostra.
Usar o software de análise profissional deste jogo será mais conveniente para a análise exata e rápida de uma grande quantidade de amostras.
Precauções
1. A temperatura ambiente abaixo do ℃ 25 ou a temperatura dos reagentes e das amostras que não estão sendo retornados à temperatura ambiente (℃ 20-25) conduzirão a um valor mais baixo do OD do padrão.
2. a seca do microplate no processo de lavagem será acompanhada das situações que incluem as curvas padrão não-lineares e a reprodutibilidade indesejável; Continue assim ao passo seguinte imediatamente depois do lavagem.
3. misture uniformemente, se não haverá a reprodutibilidade indesejável.
4. A solução da parada é a solução ácida sulfúrica de 2 M, evita o contato com a pele.
5. Não use o jogo que excede sua data de expiração. O uso de reagentes diluídos ou adulterados dos jogos conduzirá às mudanças na sensibilidade e nos valores de detecção do OD. Não troque os reagentes dos jogos de lotes diferentes para usar-se.
6. põe o microplate não utilizado em um re-selo do saco da auto-selagem ele. A solução padrão e a cor incolor anteriores são sensíveis à luz, e assim não pode diretamente ser exposta à luz.
7. rejeite a solução da coloração com toda a cor que indicar a degeneração desta solução. O valor de detecção da solução padrão 1 (0 ppb) de menos de 0,5 indica sua degeneração.
9. data do armazenamento e de expiração
Armazenamento: loja no ℃ 2-8, não congelado.
Data de expiração: 12 meses; a data da produção está na caixa.
